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EXclone载体构建系统

EXclone简介

    EXclone Kit是一款媲美Gateway系统的简便高效的克隆试剂盒,无需酶切,一个体系,一步反应即可实现: 1)将PCR片段快速定向克隆到任意EXclone载体;2)将目的片段从入门载体直接转移到任意目标载体。 EXclone系统提供强大的EXclone载体库,只需提供目标DNA片段或入门载体, 便可通过一步反应直接转移到任意EXclone载体,避免反复测序,一次克隆,解决所有。EXclone系统包含2个反应, 详细信息请参考EXclone说明书(PDF)

    ---EXIN反应:将PCR片段一步克隆到包括入门载体pEXIN在内的任意EXclone载体

    ---EXTO反应:将入门载体pEXIN中的目标片段一步克隆到所需的任意EXclone载体

------- 开始使用 -------

EXclone特性

--简易 无需酶切,一管混合, 一步反应
--方便 可将入门载体中的目标片段通过一步反应直接转移到任意EXclone载体,避免反复测序,一次克隆,解决所有
--快速 37oC反应30~60分钟即可
--高效 1000个以上的菌落数,>90%以上的阳性率,提供您所需的克隆
--灵活 同时用于入门克隆和亚克隆,兼容平末端和粘性末端
--集成 强大的EXclone载体库(涵盖适用于大肠杆菌、酵母、昆虫、植物、哺乳动物细胞等宿主的目的载体),只需提供克隆片段或入门克隆,便可高效快速构建任意EXclone载体,减少错误的产生

EXIN反应--将PCR片段一步克隆到任意EXclone载体

Step 1. 设计带有16-bp末端的引物,PCR扩增目标片段并纯化

Forward Primer: 5- TCAGCAGTCGAAGAGC + (18-25 gene specific nucleotides)
Reverse Primer:   5- TTAGCGTGTGAAGAGC + (18-25 gene specific nucleotides)

Step 2. 从EXclone载体库选择你要的入门载体或目标载体

Step 3. 建立EXIN反应体系

5X EX-Buffer2 µl
EX-Vector2 µl
EXclonase Enzyme 1 µl
Your Insert DNA X*
H2O add to 10 µl

*0.1-50 ng PCR片段

Step 4. 将反应体系混合后置于37oC孵育30分钟,然后于室温(20oC)继续放置15分钟

Step 5. 取5 µl反应液,参考标准步骤转化大肠杆菌

EXTO反应--将目标片段从入门载体一步转移到任意EXclone目标载体

Step 1. 制备含有目的片段的pEXIN质粒,建议稀释至10ng/µl

Step 2. 从EXclone载体库选择你的目标载体

Step 3. 建立EXTO反应体系

5X EX-Buffer 2 µl
EX-Vector 2 µl
EXclonase Enzyme 1 µl
pEXIN-Insert Donor plasmid X*
H2O add to 10 µl

        *0.1-20 ng 含有目标片段的入门载体质粒

Step 4. 将反应体系混合后置于37oC孵育60分钟,然后于室温(20oC)继续放置15分钟

Step 5. 取5 µl反应液,参考标准步骤转化大肠杆菌

 

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