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百格CRISPR/Cas载体构建试剂盒

一步载体构建,直接遗传转化,数百次的成功实验验证

百格CRISPR/Cas载体构建试剂盒能够将gRNA靶点序列,通过一步反应,快速高效地构建至Cas9/gRNA质粒中, 构建的质粒能够直接用于植物遗传转化。该载体的Cas9蛋白经密码子优化改造,采用拟南芥、大豆、水稻等植物的U6启动子表达gRNA序列。 数百次的遗传转化实验表明,百格CRISPR/Cas载体都能够非常高效的植物的基因敲除和编辑。

产品特点

--简便 无需酶切,一步载体构建,直接用于遗传转化
--快速 20oC反应30~60分钟即可
--高效 1000个以上的菌落数,95%以上的阳性率,提供您所需的克隆
--可靠 数百次的植物遗传转化实验,90%以上基因敲除成功率
--广泛 涵盖拟南芥、油菜、水稻、小麦和大豆等

产品组成

Package
Buffer Anneal
Vector-BGK-X
Enzyme Mix
10T
300 µl
20 µl
10 µl
百格CRISPR/Cas载体

CRISPR/Cas载体BGK01

  • 采用拟南芥U6启动子,能够高效的用于双子叶植物,特别是拟南芥
  • 采用加强型CaMV启动子,高效表达Cas9蛋白
  • CaMV 35S启动子表达潮霉素抗性基因
  • 100多次拟南芥基因敲除实验验证

CRISPR/Cas载体BGK015

  • 采用拟南芥U6启动子,能够高效的用于双子叶植物,特别是拟南芥
  • 采用加强型CaMV启动子,高效表达Cas9蛋白
  • CaMV 35S启动子表达草铵膦抗性基因
  • 100多次拟南芥基因敲除实验验证

CRISPR/Cas载体BGK03

  • 采用水稻U6启动子,能够高效的用于单子叶植物,特别是水稻
  • 采用加强型玉米UBI启动子,高效表达Cas9蛋白
  • CaMV 35S启动子表达潮霉素抗性基因
  • 300多次水稻基因敲除实验验证

CRISPR/Cas载体BGK041

  • 采用大豆U6启动子,能够高效的用于双子叶植物,特别是大豆
  • 采用加强型CaMV启动子,高效表达Cas9蛋白
  • CaMV 35S启动子表达草铵膦抗性基因
  • 数十次大豆基因敲除实验验证
使用步骤

STEP 1. 设计并生成gRNA靶点序列。识别序列一般选择19bp,例如选择靶点序列CCCCTCGGACCTCTCCTCCAGG (红色AGG为PAM序列),则该靶点序列为CCCCTCGGACCTCTCCTCC。将19-bp靶点序列输入下面对话框,百格会为您自动生成与试剂盒对应的Oligo序列, 您只要直接合成即可。

请输入19-bp靶点序列 选择载体生成Oligo 序列 (5'-3')


UP:
LOW:
构建后的载体上下游DNA序列 5’-3’(可用于测序序列比对)
 

STEP 2. 制备Oligo二聚体。将合成的Oligo加水溶解至10 µM,按下列反应体系混合后,95oC加热3分钟, 然后以约0.2oC/秒缓慢降至20oC (推荐采用PCR仪)。

Buffer Anneal
UP Oligo
Low Oligo
H2O
18 µl
1 µl
1 µl
Add to 20 µl

STEP 3. 将Oligo二聚体构建至CRISPR/Cas载体。按下列反应体系在冰上混合各个组分, 混匀后室温(20oC)反应1小时。

CRISPR/Cas Vector
Oligo 二聚体
Enzyme Mix
H2O
2 µl
1 µl
1 µl
Add to 10 µl

STEP 4. 参考标准步骤转化大肠杆菌。

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百格由多名海归和来自国内一流学府的博士组建,秉承“百思不怠,格物致知”的宗旨,致力于基因组编辑技术在 医疗健康和现代农业领域的研究、转化和应用。百格生物以基因组编辑技术为依托,将基础研究和产业应用并行发展, 遵循“百思格物”、“转化为先”、“合作共赢”、“产业报国”的发展轨迹, 实现生物科技造福人类的梦想! 基于CRISPR/Cas9技术,百格生物拥有独有的全基因组单/多位点分析设计系统、高通量的gRNA载体组装技术、高效的遗传转化技术和 基于云端的测序结果自动化分析体系;具有单基因/多基因敲除、短片段/长片段删除、单碱基/多碱基替换敲入和条件性敲除等全面的基因组编 辑技术;拥有从细胞到小鼠,从拟南芥到水稻、大豆和玉米等各个物种的基因组编辑经验。 联系电话:400-000-6787
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